آکادمی و موسسه علمی پژوهشی ابن سینا

شناسایی مولکولی گونه اسفنجCallyslpongia sp

شناسایی اسفنج Callyslpongia sp. با استخراج DNA  وانجام PCR سپس ارسال برای توالی خوانی گونه به ثبت ژنی BGPM2012- Callyslpongia sp.شناسایی شد.

قطر هاله ممانعت از رشد عصاره اسفنج Callyslpongiasp.

     بیشترین قطر هاله عدم رشد میکروبی عصاره اسفنج خشک شده(D)برای باکتری اشریشیاکلای8، استافیلوکوکوس اورئوس 15و شیگلا 10میلی متر، عصاره الکلی.(E) برای باکتری اشریشیاکلای 9، استافیلوکوکوس اورئوس 14 وشیگلا 7 میلی متر عصاره اسفنج منجمد(F) بر اشریشاکلای 8 و بر شیگلا و استافیلوکوکوس اورئوس 7 میلی متر اندازه گیری شد(جدول4-1). هیچ یک از عصاره های مذکو ربر قارچ و مخمر مورد آزمایش موثر نبودند که با نتایجDevi و همکارانش در (2012) اثر عصاره خام اسفنج Haliclondriasp.  بر کشت میکروبی اشریشاکلای و شیگلا فلکسینری  هیچ هاله ممانعت از رشد تشکیل نشد اما در محیط کشت های استافیلوکوکوس اورئوس 10-7میلی متری ایجاد کردهمطابقت دارد اما با نتایج اثر عصاره Haliclondriasp. بر آسپرژیلوس فومگانتوس  که 6-4 و کاندیداآلبیکنس 3-1 میلی متر قطر هاله ممانعت از رشد را گزارش داده اند مغایرت دارد.
طبق گزارش Palpandi (2013) اثر عصاره الکلی اسفنج های D.fragilis(7 میلی متر) ،H.cribriformis(8 میلی متر)، P.purpurea (9 میلی متر)، S.officinalis(8 میلی متر) درمحیط کشت C.albicans قطر هاله عدم رشد ایجاد شد که با نتایج عصاره الکلی در این تحقیق مطابقت دارد.
5-3 (MIC(MinimumInihibitory Concentration و (Minimum BacteriaConcentration)MBC
    حداقل غلظت مهاری رشد باکتری MIC)(در محیط کشت شیگلا با رقت 1 و سپس اشریشاکلای و استافیلوکوکوس اورئوس هر دودر رقت 2 می باشد.حداقل غلظت باکتری MBC)) رقت 1 در محیط کشت استافیلوکوکوساورئوس 3/1، در شیگلا 〖4×10〗^2 و در اشریشاکلای 〖7/3×10〗^2برآورد شده است(جدول 4-3).که با نتایج ناظمی و همکاران(1392) حداقل غلظت مهارکنندگی رشد باکتری (MIC) عصاره دی اتیل اتری اسفنج A.sinoxeaبر E.coliبرابر10 میلی گرم بر میلی لیتر و عصاره متانولی 40 میلی گرم بر میلی . لیتر واثر MICعصاره دی اتیل اتری بر S.aureus برابر 075/0 و عصاره متانولی برابر 10 میلی گرم بر میلی لیتر و حداقل کشندگی باکتری (MBC)عصاره دی اتیل اتر بر S.aurues برابر 10میلی گرم بر میلی لیتر مطابقت دارد.
طبق نتایج ناظمی و همکاران (1392) عصاره دی اتیل اتری بر اشریشاکلای اثر باکتریوسیدی نشان نداد.در این تحقیق نیز عصاره ها بر اشریشاکلای اثر باکتریوسیدالی ندارد اما اثر باکتریواستاتیکی ضعیف دارد. عصاره الکلی در این تحقیق اثر باکتریوسیدالی خوبی را نشان داد.
5-4عصاره الکلی غلیظ شده
عصاره الکلی غلیظ شده اسفنج دریایی Callyslpongi sp. بهترین اثر غلظت  A_2 با جذب 20/1 با حجم 20میکرولیتر عصاره در محیط کشت باکتری اشریشاکلای(جدول 4-5)، غلظت A_1 در محیط کشت شیگلا با حجم 20میکرولیتر،در محیط کشت استافیلوکوکوس اورئوس با حجم30 میکرولیتر (جدول 4-4)و غلظت A_3  در محیط کشت استافیلوکوکوس اورئوس با حجم 20  میکرولیتر  با جذب 50/1(جدول 4-6) بهترین اثر مهار کنندگی را نشان داده اند.
ضعیف ترین اثر عصاره غلیظ شده A_2 در حجم 20 میکرولیتر برمحیط کشت استافیلوکوکوس اورئوس با جذب 96/1 (جدول 3-5)، غلظت A_3 در حجم 40 میکرولیتر در محیط کشت شیگلا با جذب 91/1(جدول 4-6) وA_1 در حجم 40 میکرولیتر در محیط کشت اشریشاکلای با جذب 80/1(جدول 4-4) برآورد شد.
ایساک و لیپتون در سال 2012 در محیط کشت E.coli در غلظت 50  میکرولیتر عصاره قطر ناحیه مهار گنندکی رشد 2 میلی متر و با 150 میکرولیتر قطر16میلی متر  بود و برای K. pneumoniaدر غلظت 100 میکرولیتر عصاره قطر14 میلی متر ، برایputidaP. در غلظت 100 میکرولیتر قطر15 میلی متر ، برای S .liquefaciene در غلظت50میکرولیتر از عصاره قطر مهار کنندگی 16 میلی متر در صورتی که بر S . aureusدرغلظت50 میکرولیتر قطر2 میلی متر و در غلظت 100میکرولیتر قطر 12 میلی متر را نشان داد.همچنین عصاره این اسفنج بر قارچ ها اثر متوسطی را نشان داد به عنوان مثال در تست C. albicans  در غلظت50 میکرولیتر قطر6 میلی متر و در غلظت100 میکرولیتر قطر10 میلی متر و در تست P . chrysogenum غلظت های 50 و 100 میکرولیتر به ترتیب قطر 6 و3 میلی متر را اندازه گیری کردند.
بهترین اثر عصاره از نوع D بر استافیلوکوکوس اورئوس با ایجاد 15 میلی متر قطر هاله نسبت به دیگر عصاره ها را دارا بود(جدول 4-1) .
حساسیت استافیلوکوکوس اورئوس به عصاره های  اسفنج نسبت به بقیه ی  میکروب ها بیشتر و مقاومت شیگلا به این عصاره ها از همه بیشتر بود (جدول 4-1).
با وجود مطالعات قبلی فعالیت ضد قارچی بسیاری از گونه های اسفنج مشاهده شد اما در تحقیق کنونی عصاره اسفنج بر قارچ و مخمر هیچ گونه اثری نداشت از آنجایی که دیواره قارچ از کتین و گلوکان می باشد عصاره و حتی بسیاری از داروها بر این موجودات بی اثر می باشند(Palpandi et al., 2013).همچنین مقاومت باکتری گرم منفی به دارو می توان ناشی ازوجود لایه لیپوپلی ساکاریدی ،پروتئین و فسفولیپیدهای اطراف دیواره سلولی باشد که مانع ورود مواد خارجی و آنتی بیوتیک ها درون سلول شود در حالی که اطراف باکتری گرم مثبت فقط لایه پپتید و گلیکان دارند و ورود داروها آسان تر است.مقاوم شدن میکروب های  سویه ی بیماریزا به داروها باعث بیشتر شدن تحقیقات کشف آنتی بیوتیک های جدید و موثر و از آنجایی که دریاها منابع عظیم مواد زیست فعال شناخته شدند تصیمیم به اخذ این منابع به عنوان مخازن استخراج و جداسازی مواد زیست فعال طبیعی گردید (Darah et al.,2011). 
عصاره اسفنجCallyslpongia sp. فقط بر باکتری پروکاریوت موثر است و بر سلول های یوکاریوتی (قارچ و مخمر)بی اثر است وفعالیت ضد باکتری علیه باکتری های گرم مثبت بهتر از گرم منفی می باشد.مقاومت قارچ هانسبت به باکتری ها را می توان به تفاوت های ساختاری ارگانیسم های یوکاریوت و پروکاریوت ارتباط داد.
با بررسی عصاره دو گونه اسفنج دریایی خلیج فارس بر کشت میکروب های بیماری زای انسان نشان دهنده نتایج قابل ملاحظه ای مبنی بر اثر بخش بودن عصاره اسفنج Callyslpongia sp.بر پاتوزن های انسانی می باشد(تصویر شماره 4-1 و 4-2)

نتیجه گیری کلی از انجام پایان نامه ارشد بیوتکنولوژی دریایی حاضر

عصاره Callyslpongia sp. در هرسه حالت D،E ، F، بر کشت میکروبی اثر بازدارندگی را نشان داد که به نسبت ضعیف تا نسبتا خوب می باشند(جدول 4-1). قطر هاله ممانعت از رشد میکروبی عصاره نوعD  به نسبت میانگین در هر سه میکروب مورد آزمایش 9 میلی متر بیشترین و عصارهE  با 8/8 میلی متر اثر متوسط و عصاره Fبا 3/8 میلی متر اثر ضعیف تراز آن دو را نشان داده اند(جدول 4-1). تصور می شود اگر دامنه میانگین هاله ممانعت از رشد عصاره به میانگین هاله ممانعت از رشد آنتی بیوتیک به کار رفته به عنوان کنترل مثبت نزدیک می شد آن وقت می توان عنوان اثر بازدارندگی خیلی خوب را به عصاره اسفنج داد. عواملی  مانند فصل نمونه برداری، فاز رشد باکتری، مراحل و زمان عصاره گیری ، زمان نگهداری عصاره و... می تواند در این زمینه نقش موثری داشته باشد. 

پیشنهادات

با توجه به نتایج حاصل از انجام پایان نامه ارشد بیوتکنولوژی دریایی حاضر اسفنج دریایی Callyslpongiasp.  برای تحقیقات بیشتر جهت استخراج و خالص سازی وشناسایی ترکیبات ضد باکتری کاندیدای بسیار خوبی می باشد.

در صورت نیاز به مشاوره در زمینه انجام پایان نامه ارشد خود با ما در ارتباط باشید.